临床上，约25-30%的乳腺癌病人有HER-2/neu基因的扩增和/或过度表达，乳腺癌细胞中Her/2-neu基因的扩增常预示着患者预后较差。1998年FDA批准了作为基因治疗的一种单克隆抗体herceptin(中文名为赫赛汀)治疗乳腺癌，即乳腺癌靶向治疗。随着靶向治疗在临床上应用，“FISH检测”常为人们提及和熟悉，有必要对其基本原理有所了解。

 名称释义

 FISH 中文名：荧光原位杂交技术；英文名：fluorescent in situ hybridazation, 其缩写为FISH 。

 基本原理

 原位杂交技术：协助利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列，将有放射性或非放射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件：组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物。

 原位杂交的探针按标记分子类型分为放射性标记和非放射性标记。如果是采用荧光标记探针系统的原位杂交技术就是FISH(Fluorescence in situ hybridization)技术，通过荧光检测系统(荧光显微镜)检测信号DNA序列在染色体或DNA显微切片上的目的DNA序列，进而确定其杂交位点。FISH技术检测时间短，检测灵敏度高，无污染，已广泛应用于染色体的鉴定、基因定位和异常染色体检测等领域。

 FISH是原位杂交技术大家族中的一员，因其所用探针被荧光物质标记（间接或直接）而得名，该方法在80年代末 被发明，现已从实验室逐步进入临床诊断领域。荧光标记的核酸探针在变性后与已变性的靶核酸在退火 温度下复性；通过荧光显微镜观察荧光信号可在不改变被分析对象（即维持其原位）的前提下对靶核酸进行分析。DNA荧光标记探针是其中最常用的一类核酸探针。利用此探针可对组织、细胞或染色体中的DNA进行染色体及基因水平的分析。其基本过程：FISH样本的制备→探针的制备→探针标记→杂交→染色体显带→荧光显微镜检测→结果分析。

 优缺点

 FISH技术作为非放射性检测体系，具有以下优点：

 1、荧光试剂和探针经济、安全；

 2、探针稳定，一次标记后可在两年内使用；

　　

 3、实验周期短、能迅速得到结果、特异性好、定位准确；

　　

 4、FISH可定位长度在1kb的DNA序列，其灵敏度与放射性探针相当；

　　

 5、 多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列；

　　

 6、既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化，也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构。

　　

 缺点：不能达到100%杂交，特别是在应用较短的cDNA探针时效率明显下降。　

 临床应用

　　

 FISH技术不但可用于已知基因或序列的染色体定位，而且也可用于未克隆基因或遗传标记及染色体畸变的研究。在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究中颇具优势。如在细胞遗传学检查中，重复序列的探针应用最多，它们是 α-卫星DNA、β-卫星DNA和经典卫星DNA探针。FISH在白血病方面和应用较为方泛的是慢性粒细胞白血病bcr/abl易位DNA探针。

　　

 在实体肿瘤方面，应用较为广泛的是HER-2/neu基因探针。FISH检测HER-2/neu基因的原理是利用标记了荧光信号的对HER-2/neu DNA特异的探针，杂交到病变组织细胞的17号染色体长臂（17q11.2-q12）上，然后在荧光显微镜下观察，所以在组织原位直接显示了此基因扩增与否的情况。同时用标记了其它荧光信号的CSP17DNA探针做为对照，杂交到17号染色体着丝粒(17p11.1-q11.1)上，这种双探针同标记的方法，进一步保证了观察的准确性。在FISH技术之前的所有测定基因扩增的方法，都是采用经典的分子生物学方法，但这些方法与FISH相比，不仅费时费力，而且也不可能在细胞水平上观察到基因扩增的状态。FISH技术的更大优点是可以在间期细胞核上观察到DNA扩增的直接证据，而且间期细胞核所显示出的扩增DNA荧光信号其数量多少及荧光强度常与DNA扩增的水平有关。同时，HER-2/neu基因的扩增或过表达也见于卵巢癌、子宫内膜癌、涎腺肿瘤及胃癌等恶性肿瘤。其它一些实体瘤的肿瘤的肿瘤基因的探针如N-myc,C-myc,CyclinD1等虽有商业出售，但目前还未用于临床。

作者：汪成，副主任医师，上海市黄浦区中心医院乳腺外科

来源：好大夫在线